甘蔗是最重要的糖料作物。甘蔗條紋花葉病毒(SCSMV)引發(fā)的甘蔗花葉病可導(dǎo)致產(chǎn)量和蔗糖含量大幅下降。在病害防控過(guò)程中，目標(biāo)病原體檢測(cè)技術(shù)是不可或缺的。然而，傳統(tǒng)的檢測(cè)方法耗時(shí)且需要昂貴的設(shè)備，對(duì)及時(shí)防控病害和抗病育種均不利。該研究建立了一種新型的檢測(cè)技術(shù)體系，采用葉片粗提物為反應(yīng)模板，極大簡(jiǎn)化和加快了樣品的制備過(guò)程，通過(guò)將重組酶聚合酶擴(kuò)增(RPA)與CRISPR-Cas12a相結(jié)合，提高了檢測(cè)的靈敏度并且結(jié)果能夠可視化(圖 1)。

　　該技術(shù)從樣品制備到結(jié)果解讀整個(gè)實(shí)驗(yàn)流程，只需50分鐘，反應(yīng)設(shè)備只需一個(gè)水浴鍋，并且結(jié)果可以用藍(lán)光光譜儀或紫外手電筒進(jìn)行目視判定。更重要的是，該技術(shù)具有高靈敏度，最低檢測(cè)極限為50拷貝，超過(guò)了RT-PCR的靈敏度，與RT-qPCR相當(dāng)（圖2）。同時(shí)，該方法展現(xiàn)出卓越的特異性，與其他常見(jiàn)的甘蔗病毒，如甘蔗花葉病毒、甘蔗黃葉病毒和高粱花葉病毒，均無(wú)交叉反應(yīng)（圖3）。通過(guò)檢測(cè)40個(gè)田間樣品葉片粗提物，驗(yàn)證了該技術(shù)的實(shí)用性與穩(wěn)定性，其檢測(cè)結(jié)果與采用葉片RNA為模板的RTkaiyun中國(guó)網(wǎng)頁(yè)版登錄-PCR和RT-qPCR檢測(cè)結(jié)果100%一致，表明該對(duì)實(shí)驗(yàn)室和田間現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)均適用（圖4）。

　　福建農(nóng)林大學(xué)國(guó)家甘蔗工程技術(shù)研究中心在讀碩士研究生高帥為該論文的第一作者，福建農(nóng)林大學(xué)國(guó)家甘蔗工程技術(shù)研究中心/農(nóng)業(yè)農(nóng)村部甘蔗生物學(xué)與遺傳育種重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/農(nóng)學(xué)院許莉萍研究員和福建農(nóng)林大學(xué)國(guó)家甘蔗工程技術(shù)研究中心在讀博士研究生王婷為該論文的共同通訊作者，國(guó)家甘蔗工程技術(shù)研究中kaiyun中國(guó)網(wǎng)頁(yè)版登錄心郭晉隆副研究員參與了研究工作。研究得到了國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃和農(nóng)業(yè)農(nóng)村部國(guó)家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)項(xiàng)目的聯(lián)合資助。